Para usar el mínimo número de animales se emplean cálculos matemáticos que estiman el número necesario. Un número inferior al necesario no sería adecuado porque no se podría demostrar el efecto beneficioso. Es importante recordar que los animales deben estar en óptimas condiciones en las instalaciones ya que el estrés, angustia u otro tipo de sufrimientos producirá cambios que alterarían los resultados de las investigaciones. Además, estos efectos negativos también suelen requerir el empleo de un mayor número de animales, por lo que deben evitarse