La presente invención se refiere a un método para detectar y/o cuantificar ADN de caballo en muestras aisladas, especialmente en mezclas de carne sospechosas de fraudes por inclusión de carne de caballo en mezclas de carnes económicamente más valoradas. La invención también se refiere a un kit que contiene los elementos para preparar un biosensor electroquímico amperométrico para detectar y/o cuantificar porcentajes de hasta el 0,5% de carne de caballo en mezclas de otras carnes, sin necesidad de extraer el ADN ni de realizar amplificaciones mediante la técnica de PCR. Dicho biosensor utiliza secuencias específicas del ADN mitocondrial de caballo, un anticuerpo detector de dúplex de ácidos nucleicos, una proteína bacteriana con capacidad de unión a la región Fc de inmunoglobulinas y una molécula de generación y amplificación de la señal electroquímica.