TECNICAS

12 JUN 2013 - 09:56 CET

Técnicas experimentales

Técnicas Farmacológicas in vitro

• Contractilidad in vitro de músculo liso vascular y no vascular (próstata humana, rata y conejo, conducto deferente de ratón).
• Contractilidad vascular en arterias de      resistencia in vitro (miografía).
• Presión de perfusión (lecho mesentérico, pulmón      aislado y perfundido, arteria caudal).
• Estudios de contractilidad cardíaca in vitro.
• Análisis receptoriales por técnicas de fijación      de radioligandos y por autorradiografía y densitometría.
• Tránsito intestinal

Técnicas Farmacológicas in vivo

• Medidas de      analgesia, hot plate, writing- test, tail-flick, test de carragenina.
• Actividad      locomotora
• Cuantificación de parámetros conductuales: test      del laberinto.
• Realización de escalas de valoración de daño      neurológico.
• Catalepsia: Ring test
• Medida de presión arterial incruenta      (tail-cuff).
• Medida de presión arterial directa.
• Microdiálisis intracerebral in vivo.
• Determinación de la temperatura cerebral y      rectal.
• Administración de fármacos vía i.p., s.c., i.v.,      i.c.v.
• Determinación de niveles de neurotransmisores, amino ácidos excitatorios e inhibitorios y diversos fármacos en tejido cerebral, líquido cefalorraquídeo y plasma por HPLC con detección ultravioleta, fluorimétrica y electroquímica (amperométrica y culombimétrica), y fluorimétrica.
• Modelos de isquemia cerebral y de tolerancia isquémica in vitro (cultivos neuronales y rebanadas de cerebro anterior expuestos a privación de oxígeno y glucosa) e in vivo (isquemia focal por oclusión permanente o transitoria de la arteria cerebral media de rata, oclusión por tromboembolismo).
• Estereotaxia.

Técnicas electrofisiológicas

• Registro de potenciales de acción cardíacos.
• Registro de corrientes iónicas (parche de      membrana).

Cultivos celulares:

• Astrocitos, microglía, neuronas corticales, neuronas      de hipocampo, neuronas granulares de cerebelo, neuroesferas
• Células endoteliales,  células progenitoras endoteliales,
• Células de músculo liso vascular,
• Líneas celulares.
• Co-cultivos.

Técnicas bioquímicas y de biología molecular

• Determinaciones de expresión de proteínas      (Western blot) y
• Determinaciones de expresión de mRNA (RT-PCR      cuantitativa).
• Aislamiento de mitocondrias y partículas      submitocondriales.
• Aislamiento de sinaptosomas.
• Aislamiento de membranas plasmáticas.
• Determinación del consumo de oxígeno por      mitocondrias y partículas submitocondriales.
• Estudio de la captación de neurotransmisores      marcados por células y sinaptosomas.
• Estudios de factores de transcripción por      ensayos de retardo en gel.
• Actividades enzimáticas: NO sintasa, TACE (TNF-a convertasa), COX, metaloproteasas, mieloperoxidasa, complejos de la cadena respiratoria mitocondrial.
• Inmunohistoquímica e inmunocitoquímica con      visualización por microscopía de contraste de fase y de fluorescencia.
• Determinación de parámetros de necrosis: medida de las actividades enzimáticas de lactato deshidrogenasa y enolasa neuronal específica, tinción celular con azul Tripán, ioduro de propidio, MTT...
• Determinación de parámetros de apoptosis: TUNEL,      Hoechst 33342, anexina V, caspasa 3,...
• Determinación de parámetros de estrés oxidativo: medida de tioles totales, medida de glutatión oxidado y reducido, medida de peroxidación lipídica...
• Determinación de ATP y ADP, NO2-/NO3-, cGMP y      cAMP, TNF-a, prostaglandinas,...
• Determinación de los niveles de etanol en      plasma.
• Ensayos de actividad GTPasa.
• Determinación de Ca²⁺ citosólico      (fluorescencia de fura-2).
• Determinación de NO (fluorescencia de daf-2 y      electrodo amperométrico)