Complutecno: Agricultura, Ganadería y Recursos Marinos
DETECCIÓN DE NEOSPORA CANINUM EN MUESTRAS DE SEMEN BOVINO
Descripción:
Neospora caninum es el agente causal de la neosporosis, una enfermedad de distribución mundial, considerada en la actualidad como una de las principales causas de aborto y mortalidad neonatal en el ganado bovino y, por tanto, de una importancia indiscutible en el campo de la Sanidad Animal. Se presenta un procedimiento de detección-cuantificación del parásito Neospora caninum en muestras de semen bovino. Este procedimiento aporta una nueva tecnología que permite identificar aquellos sementales que eliminan N. caninum en su semen, cuantificándolo. Se buscan empresa interesadas en aplicar esta tecnología para la valoración de semen de sementales bovinos o en desarrollar un kit comerciar basado en este procedimiento.
¿Cómo funciona?:
Fig. 1: Estandarización de la PCR cuantitativa en tiempo real.
Esta tecnología pertenece al campo de la sanidad animal y proporciona un nuevo procedimiento para la cuantificación de Neospora caninum en muestras de semen bovino. En cuanto a la importancia de la eliminación del parásito en el semen y su posible transmisión venérea o mediante la inseminación artificial, viene respaldada por diversos hechos epidemiológicos, como la presencia de anticuerpos específicos frente a la infección por el parásito en sementales bovinos, pero sobre todo por la demostración de la eliminación seminal del parásito en el semen de toros congénitamente infectados.
La tecnología que ofrecemos consiste en la normalización y aplicación de la técnica de PCR cuantitativa en tiempo real para la cuantificación del ADN de N. caninum en muestras de semen bovino, tanto fresco como congelado.
La cuantificación del ADN de este parásito se basa en el desarrollo de un método de extracción a partir de muestras de semen que resuelve los fenómenos de inhibición que se producen con este tipo de muestras, mediante la utilización de columnas de cromatografía para el semen congelado, que posteriormente se somete a cuantificación por técnicas de PCR. La técnica se aplica también en la cuantificación de un gen del hospedador con el fin de poder comparar la carga parasitaria de diferentes muestras y detectar la presencia de inhibidores.
Esta técnica posee valiosas aplicaciones, particularmente en la especie bovina, donde la inseminación artificial es una práctica habitual y la utilización de técnicas diagnósticas sensibles y específicas se hace necesaria a la hora de determinar el estado sanitario de los sementales bovinos, especialmente en centros de inseminación artificial. Además, este procedimiento en explotaciones de manejo extensivo, donde la monta natural tiene gran importancia, adquiere una gran relevancia.
Ventajas:
Esta tecnología aporta un procedimiento novedoso para la detección y cuantificación de N. caninum en muestras de semen bovino, lo cual representa una herramienta imprescindible para el control de la neosporosis. El empleo de la técnica desarrollada permitirá identificar los sementales bovinos que eliminan el parásito en su semen, ya sea aquellos pertenecientes a empresas dedicadas a la inseminación artificial o los utilizados en monta natural, mejorando así la competitividad de dichas empresas mediante la selección de los sementales de calidad óptima.
El uso de la PCR en tiempo real posee numerosas ventajas sobre las t écnicas de PCR convencionales, como la amplificación, detección y cuantificación del producto en un mismo proceso, posibilitando el análisis de un elevado número de muestras y obviando la necesidad de manipulaciones después de la PCR, reduciendo así el riesgo de posibles contaminaciones y acortando el periodo de tiempo en el que se obtienen los resultados. La utilización de un agente intercalante del ADN (SYBR Green I) como sistema de cuantificación del ADN presenta la ventaja sobre las sondas TaqMan de no requerir el uso de sondas de hibridación lo que facilita enormemente su aplicabilidad y disminuye los costes de la síntesis y marcado de las sondas.
¿Dónde se ha desarrollado?:
El grupo de investigación dirigido por el Dr. Luis Miguel Ortega Mora pertenece al Departamento de Sanidad Animal de la Facultad de Veterinaria de la UCM. Desde el año 1996 dicho grupo ha desarrollado una importante labor investigadora en el campo de la parasitología y la sanidad animal y fundamentalmente en el estudio de protozoos parásitos del grupo Apicomplexa con dos líneas de investigación básicas: criptosporidiosis y neosporosis.
El estudio de la neosporosis desarrollado incluye el análisis de seroprevalencia de la enfermedad en España, el desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico y modelos experimentales de patogenia adecuados para el estudio de la infección, el aislamiento y estudio de la diversidad biológica del parásito N. caninum, así como el desarrollo de nuevos productos vacunales, incluyendo vacunas recombinantes.
Esta labor investigadora se ha desarrollado gracias a la financiación publica y privada a través de diferentes proyectos nacionales (CICYT, PETRI, Art. 83), europeos (European Comisión, Programas de acciones integradas y Acciones COST) e internacionales (Programa de Cooperación Científica con Iberoamérica). Como resultado se han obtenido diversos artículos publicados en revistas científicas con un alto índice de impacto a nivel internacional y nacional, así como la solicitud de dos patentes.
[más información sobre el departamento y el grupo de investigación]
Y además:
Esta tecnología está dirigida a Laboratorios o empresas de diagnóstico especializados en Sanidad Animal para ser aplicada en centros de inseminación artificial de ganado bovino y en las explotaciones que realizan monta natural. En este sentido puede interesar a empresas de biotecnología o productos veterinarios la realización de un kit comercial.
Los procedimientos aquí descritos se han protegido mediante patente (actualmente en trámite).
El grupo de investigación ofrece sus conocimientos para completar el desarrollo de la tecnología ofertada.
