Complutecno: Biotecnología

INMORTALIZACIÓN DE LINFOCITOS T DE MUCOSA INTESTINAL Y GÁSTRICA

Descripción:

Linfocitos T aislados de mucosa intestinal o gástrica son inmortalizados con Herpesvirus saimiri. Esto permite obtener cultivos indefinidos de linfocitos T intestinales o gástricos.

Fig. 1: Sección de intestino. Tinción con FITC.

¿Cómo funciona?:

Fig. 2: Aislamiento de células epiteliales y linfocitos de la mucosa intestinal y gástrica.

Se parte de piezas intestinales o gástricas obtenidas por endoscopia o cirugía, provenientes de pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal (enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa) o infección por Helicobacter pylori.

Las piezas son lavadas con solución fisiológica y un cóctel de antibióticos. Posteriormente se procede a una digestión enzimática con colagenasa y dispasa. Esta digestión libera las células linfoides del resto de las células epiteliales. Para su purificación y aislamiento se realiza una centrifugación en un gradiente de Percoll (67%, 44% y 20%), obteniéndose poblaciones purificadas de linfocitos, por una parte, y células epiteliales por otra. Los linfocitos son transformados con el Herpesvirus saimiri (HVS). Este virus tiene tropismo por las células T, de forma que se consigue así inmortalizar linfocitos T provenientes de la mucosa intestinal o gástrica.

El proceso de transformación se realiza resuspendiendo las células (2x10⁶/ml) en RPMI 1640 y medio CG suplementado con 100 U/ml de IL-2. Las células se siembran en placas de 24 pocillos y se exponen a dosis de HVS cepa C488. La fuente del virus proviene de sobrenadantes de cultivo de la línea celular OMK (células de riñón de mono). Después de la infección, las células son suplementadas regularmente con 100 U/ml de IL-2. Dos meses después de la infección las líneas celulares T muestran un crecimiento regular con morfología y fenotipo estables, lo que indica su transformación. La presencia del genoma viral (HVS) en las células transformadas se demuestra mediante técnicas de PCR.

Ventajas:

Fig. 3: PCR de linfocitos T transformados con HVS.

La ventaja principal de esta tecnología es la posibilidad de tener cultivos celulares duraderos de linfocitos T derivados de la mucosa intestinal o gástrica. Las metodologías existentes hoy en día permitían únicamente establecer cultivos de este tipo de células durante unos pocos meses.

El poder tener cultivos duraderos permite llevar a cabo una mayor cantidad de experimentos y estudios con estos linfocitos T, que juegan un papel importante en las patologías intestinales y gástricas anteriormente mencionadas.

¿Dónde se ha desarrollado?:

Esta tecnología se ha puesto a punto en el Departamento de Inmunología de la Facultad de Medicina de la Universidad Complutense de Madrid y en el Servicio de Inmunología del Hospital Universitario 12 de Octubre (UCM). Los primeros resultados obtenidos fueron publicados en la revista Tissue Antigens: Martín-Villa JM, Ferre-López S, López-Suárez JC, Pérez-Blas M, Castellano-Tortajada G, Sánchez-Gómez F, Arnaiz-Villena A. Successful in vitro immortalization of human intestinal mucosal lynphocytes with Herpes Virus Saimiri. Tissue Antigens 1998, 52: 5 430-434.

[más información sobre el departamento y el grupo de investigación]

Y además:

La presente tecnología puede tener varias aplicaciones, algunas de ellas relevantes para la industria farmacéutica:

1. Se puede iniciar un estudio funcional y fenotípico de las células en cultivo. Puesto que están inmortalizadas, no es necesario obtener muestras de biopsia cada vez que se quiera realizar un experimento, ya que tenemos una fuente duradera de linfocitos T. El papel de estos linfocitos es crítico en los mecanismos inmunopatológicos de las enfermedades anteriormente citadas:

• Enfermedad inflamatoria intestinal: características fenotípicas y funcionales de los linfocitos de la mucosa intestinal. Diferencias con linfocitos T de sangre periférica de estos pacientes.
• Tumores gástricos: características de los linfocitos T que infiltran el tumor. Caracterización del antígeno tumoral que pudiera estar reconociendo.
• Infección por Helicobacter pylori: respuesta de linfocitos de la mucosa gástrica frente al patógeno.

2. Para las industrias farmacéuticas puede ser útil para ensayos in vitro de nuevos fármacos, antes de su uso en pacientes:

• Enfermedad inflamatoria: uso de nuevas sustancias inmunosupresoras o moduladores biológicos. Parece claro que los linfocitos T de la mucosa intestinal juegan un papel relevante en la cronificación de la inflamación intestinal.
• Tumores gástricos: la caracterización del antígeno reconocido por los linfocitos T infiltrantes del tumor puede, en un futuro, permitir instaurar tratamientos de inmunoterapia.